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考马斯亮蓝G-250染色液图片
产品货号:
TD0048
中文名称:
考马斯亮蓝G-250染色液
英文名称:
产品规格:
100ml|500ml
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(Imax),由465nm变为595nm,在一定的浓度范围内,测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,样品中巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM,但受略高浓度的去垢剂影响,需确保SDS的浓度低于0.1%,Triton X-100低于0.1%,Tween 20、60、80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用BCA蛋白浓度测定试剂盒。保存:RT,避光,有效期6个月。

需要自备试剂:
PBS、BSA标准品(5mg/mL)

操作步骤:

一、微孔酶标仪法
1.完全溶解蛋白标准品,取10μL,稀释至250μL,使终浓度为0.2mg/mL。待测蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。
2.将标准品按0,2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中,加PBS稀释液补足到20微升。
3.将样品作适当稀释(最好多做几个梯度,如作2倍、4倍、8倍稀释),加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
5.各孔加入200微升的1×G250染色液,室温放置3~5分钟。
6.用酶标仪测定A595,或560~610nm之间的其它波长的吸光度。
7.根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。

二、分光光度计法
如无酶标仪,染色反应可在离心管中进行,反应液混匀后加入比色皿中,使用分光光度计测定吸光值。

步骤如下:
1.取八支(或者更多)干净的10mL离心管,标记上号。
2.取100μL BSA加入PBS 2.4mL稀释至终浓度为0.2mg/mL。

离心管号1234567(样品管1)8(样品管2)9(样品管3)
标准蛋白BSA0μL100μL200μL300μL400μL500μL500μL适当稀释的样品1500μL适当稀释的样品2……
PBS500μL400μL300μL200μL100μL0μL0μL0μL0μL
1×G250染色液5mL5mL5mL5mL5mL5mL5mL5mL5mL


按下表加入试剂(以每孔5mL计,多余的用来清洗比色皿)。
应3分钟后测OD值。为了实验的准确性,可每间隔2分钟加一管染色液,每间隔2分钟测一管OD值。如下表:

离心管号12345678……
加染色液(分钟)02468101214……
测OD值357911131517……

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